dna电泳检测,dna电泳检测实验报告

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  • 2024-10-17 04:41:37

大家好,今天小编关注到一个比较有意思的话题,就是关于dna电泳检测的问题,于是小编就整理了3个相关介绍dna电泳检测的解答,让我们一起看看吧。

DNA凝胶电泳检测原理及方法是什么?里面的试剂和其浓度各是多少?

原理:1.琼脂糖或者丙烯酰胺凝胶的分子筛作用

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2.DNA分子结合SDS后在电场的作用下向正极移动

3.DNA分子的大小和形状的区别会在凝胶中区分出来,大的跑的慢,线性比环形跑的慢

电泳缓冲液TAE或者TBE:

1、0.04mol/L Tris-乙酸 0.001mol/L EDTA pH=8.5

2、Tris-硼酸(TBE)0.045mol/L Tris-硼酸 0.001mol/L EDTA pH=8.3

用琼脂糖凝胶电泳怎么检测DNA质量,什么是标准?

DNA如果降解或者混有其他杂质比如蛋白质、RNA的话,在电泳中可以检测的到.线性的单一DNA样品一般是单条带,质粒的话可能会有2-3条带.如果条带变宽、变暗、或者变成弥散的DNA条带,表示DNA非特异的降解.‘如果条带变成多条,表示可能被酶切.如果质粒被单酶切,可能变成一条亮带.如果有蛋白质污染,上样孔可能发亮.如果有RNA污染,可能小分子量部分会有弥散.等等.标准是电泳条带亮度.通过亮度可以粗略计算DNA条带的含量.如果DNA有损失,对应的条带会变暗或者消失

如果DNA出现降解或者是混有其他杂质,例如蛋白质、RNA的话,那么琼脂糖凝胶就能够检测得到DNA的质量。

标准主要是通过观察电泳条带的亮度,通过亮度就可以粗略地计算出DNA条带的含量。如果DNA出现损失,对应的条带就会变暗或者是消失。

DNA的限制性酶切及电泳分析实验方法?

1. 反应体系的建立:⑴ 在一无菌1.5 ml Eppendorf管中加入:?无菌双蒸水 7 μl?10×酶切缓冲液 2 μl?质粒DNA(100 ng/μl) 10 μl?EcoRⅠ(5 U/μl) 1 μl?总体积为20μl⑵ 轻轻混匀,12000 rpm离心5 sec。

2. 37 ℃水浴1 h。3. 将Eppendorf管置65 ℃水浴中10 min,通过加热使酶失活以终止反应。4. 12000 rpm离心5 sec,将管盖及管壁上的水离下。5. 取10 μl消化产物,与2 μl 6×上样缓冲液混匀,琼脂糖凝胶电泳检测消化效果,电泳条件:约100 V 30~60 min。6 结果观察。操作注意事项:1. 吸样量一定要准确2. 为了不使酶污染而导致浪费,最后才加酶3. 要求在冰上操作,并充分混匀,4. 开启Eppendorf管时,手不要接触到管盖内面,以防污染。5. 样品在37 ℃与65 ℃保温时,将离心管盖严,以防水进入管内造成实验失败。限制性内切酶酶解中常见的问题和原因1. DNA完全没有被限制性内切酶切割:①限制性内切酶失活;②DNA不纯,含有SDS、有机溶剂、EDTA等;③非限制性内切酶最佳反应条件;④酶切位点被修饰;⑤DNA上不存在该酶的识别顺序。2. DNA切割不完全:①限制性内切酶活性下降或稀释不正确;②DNA不纯或反应条件不佳;③酶切位点被修饰;④部分DNA溶液粘在管壁上;⑤酶切后DNA粘末端退火。3. DNA片段数目多于理论值:①限制性内切酶星号活力;②存在第二种限制性内切酶污染;③样品DNA中含有其它DNA。可以到生物帮上查找这方面的信息啊,那里拥有生物领域内丰富的资源,有空的话,可以去 www.bio1000.com/zt/dna/164670.html 那里看下啊。

到此,以上就是小编对于dna电泳检测的问题就介绍到这了,希望介绍关于dna电泳检测的3点解答对大家有用。

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