大家好，今天小编关注到一个比较有意思的话题，就是关于蛋白质检测方法双缩脲的问题，于是小编就整理了4个相关介绍蛋白质检测方法双缩脲的解答，让我们一起看看吧。
双缩脲试剂检测蛋白质的原理？
双缩脲试剂的配制取10g氢氧化钠放入量筒中,加水至100mL,待充分溶解后倒入试剂瓶中,配成质量浓度为0.1g/mL的氢氧化钠溶液,瓶口塞上胶塞,贴上标签,写上试剂A。
取1g硫酸铜放入量筒中,加水至100mL,待充分溶解后倒入试剂瓶中,配成质量浓度为0.01g/mL的硫酸铜溶液(蓝色)。
瓶口塞上胶塞,贴上标签,写上试剂B。检测蛋白质的特异性反应是与双缩脲试剂作用,产生紫色反应.
为什么双缩脲反应能检测蛋白质的水解程度？
首先你应该明白双缩脲反应的实质：在弱碱性溶液中，双缩脲（H2NOC－NH－CONH2）能与铜离子（Cu2+）作用，形成紫色络合物。
注意，只有蛋白质的肽键才能参与此反应，而水解产物氨基酸等则不能，所以在溶液里，颜色会随着蛋白质水解的增加而变淡，这样就可以定量的反应水解程度。
双缩脲法测定蛋白质含量的原理和方法？
原理
在碱性溶液中，双缩脲(H2N-CO-NH-CO-NH2)与二价铜离子作用形成紫红色的络合物，这一反应称双缩脲反应。凡分子中含二个或二个以上酰胺基(—CO-NH2)，或与此相似的基团[如—CH2-NH2，—CS-NH2，—C(NH)NH2]的任何化合物，无论这类基团直接相连还是通过一个碳或氮原子间接相连，均可发生上述反应。蛋白质分子含有众多肽键(—CO-NH—)，可发生双缩脲反应，且呈色强度在一定浓度范围内与肽键数量即与蛋白质含量成正比，可用比色法测定蛋白含量。测定范围为1～10mg蛋白质。干扰这一测定的物质主要有：硫酸铵、Tris缓冲液和某些氨基酸等。
方法:
1.标准曲线 的测定：取12支试管分两组，分别加入0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0毫升的标准蛋白质溶液，用水补足到1毫升，然后加入4毫升双缩脲试剂 。充分摇匀后，在室温（20～25℃）下放置30分钟，于540nm处进行比色测定。用未加蛋白质溶液的第一支试管作为空白对照液。取两组测定的平均值 ，以蛋白质的含量为横座标，光吸收值为纵座标绘制标准曲线。
2、样品的测定：取2～3个试管，用上述同样的方法，测定未知样品的蛋白质浓度。注意样品浓度不要超过10mg/ml
双缩脲试剂能否检验二肽？
不能
双缩脲是由两分子尿素缩合而成的化合物（H2N—CO—NH—CO—NH2），该化合物中含有—CO—NH的结构，与蛋白质或肽中的肽键结构相同。同时放出一分子氨。
双缩脲在碱性溶液中能与硫酸铜反应产生紫色络合物，此反应称双缩脲反应；把一定浓度的氢氧化钠和硫酸铜溶液称为双缩脲试剂。
蛋白质分子中含有许多和双缩脲结构相似的肽键，因此也能起双缩脲反应。双缩脲反应是肽和蛋白质所特有的，而氨基酸所没有的一个反应。
一般含有两个或两个以上肽键化合物都能与硫酸铜碱性溶液发生双缩脲反应，
从而用来鉴定蛋白质的存在；另外，利用这个反应借助分光光度计可以测定蛋白质的含量
蛋白质因为含有许多和双缩脲结构相似的肽键，所以可以发生双缩脲反应。而二肽只有一个肽键，不会发生反应。双缩脲反应条件，含两个或两个以上肽键的多肽或蛋白质，或者其他具有相似结构的化合物。
到此，以上就是小编对于蛋白质检测方法双缩脲的问题就介绍到这了，希望介绍关于蛋白质检测方法双缩脲的4点解答对大家有用。
